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利用氧電極測(cè)定光合細(xì)菌在特殊條件下的產(chǎn)氫量

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氫氣作為一種無(wú)碳的清潔能源,具有發(fā)熱值高、能量轉(zhuǎn)化效率高和燃料產(chǎn)物清潔無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn),是一種極有潛力的化石燃料替代能源。生物制氫方式通過(guò)完整的細(xì)胞催化有機(jī)物或水裂解生成氫氣,降低了反應(yīng)的活化能,無(wú)需苛刻的反應(yīng)條件,使制氫過(guò)程變得簡(jiǎn)單易行,但是由于受到原料成本和制氫效率的限制,目前其生產(chǎn)成本仍然較高。

到目前為止,已報(bào)道的能進(jìn)行生物產(chǎn)氫的生物有5種,分別是異養(yǎng)型厭氧細(xì)菌、固氮菌、厭氧光合營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌、真核藻類和藍(lán)細(xì)菌。根據(jù)生物種類、是否需要光照以及底物的不同等方面分為兩個(gè)大的類別:發(fā)酵制氫和光水解制氫。

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其中發(fā)酵制氫分為暗發(fā)酵制氫和光發(fā)酵制氫,光解水制氫可以分為綠藻光合制氫和藍(lán)藻光解水制氫。紫色非硫細(xì)菌是一類光能自養(yǎng)型細(xì)菌,多分布在淡水、海水和高鹽等含有可溶性有機(jī)物和低氧壓的水生環(huán)境中,也常見(jiàn)于潮濕的土壤和水稻田中。

英國(guó)Hansatech生產(chǎn)的Clark液相氧電極是一款測(cè)定溶液中氧氣含量的經(jīng)典儀器。經(jīng)過(guò)特殊的電鍍可以改變電極的陰極和陽(yáng)極進(jìn)行其他氣體的測(cè)定,包括氫氣、一氧化氮等。

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近期,Medhat Elbadry課題組于International journal of hydrogen energy雜志發(fā)表了題為"Photoheterotrophic growth of purple non-sulfur bacteria on Tris Acetate Phosphate Yeast extract (TAPY) medium and its hydrogen productivity in light under nitrogen deprivation"的研究論文。

報(bào)道了紫色非硫細(xì)菌(PNSB)在磷酸三乙酯酵母抽提物(TAPY)培養(yǎng)基上進(jìn)行異養(yǎng)生長(zhǎng)和使用Clark氧電極(Hansatech,英國(guó))測(cè)定其在不同條件下的產(chǎn)氫量。

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圖注:在供氮培養(yǎng)基TAPY中培養(yǎng)R. rubrum DSM 467 (A), R. sphaeroides DSM 5864 (B) 和 R. capsulatus JCM-21090 (C)的生長(zhǎng)狀況。

研究發(fā)現(xiàn),在缺氮條件下,與黑暗生長(zhǎng)相比,PNSB在照光條件下生長(zhǎng)更快產(chǎn)氫更多。在無(wú)氮條件下紫色非硫細(xì)菌R.sphaeroides DSM 5864(以下簡(jiǎn)稱DSM 5864)發(fā)酵20h后開(kāi)始產(chǎn)氫,78h達(dá)到最大積累量,發(fā)酵42h后達(dá)到最大產(chǎn)氫速率0.669mmol H2 h-1 L-1。由于在缺氮條件下能夠產(chǎn)生氫氣,而在充氮培養(yǎng)基上不產(chǎn)生氫氣,說(shuō)明固氮酶是負(fù)責(zé)制氫的酶。

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圖注:在光照條件下,無(wú)氮TAPY培養(yǎng)基中,R.sphaeroides DSM 5864的累積產(chǎn)氫量(●)和產(chǎn)氫速率(○)。

在無(wú)氮TAPY培養(yǎng)基上,DSM 5864在黑暗中無(wú)法產(chǎn)生的氫氣,表明光對(duì)產(chǎn)氫過(guò)程是必要的。由于氫只在缺氮和光照條件下產(chǎn)生,因此,DSM 5864中的固氮酶活性需要光來(lái)驅(qū)動(dòng)電子傳遞,從而產(chǎn)生固氮酶所必需的ATP。
DSM 5864可能存在光合和厭氧呼吸電子傳遞的相互作用,這需要光和有機(jī)碳源(乙酸)來(lái)激發(fā)固氮酶的產(chǎn)氫活性。因此,無(wú)氮、光照和乙酸是固氮酶產(chǎn)生氫氣所必需的。

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圖注:在光照和黑暗條件下,無(wú)氮TAPY培養(yǎng)基中,R.sphaeroides DSM 5864的累積產(chǎn)氫量。光照(●),黑暗(○)

為了研究無(wú)氮TAPY培養(yǎng)基上重復(fù)分批產(chǎn)氫的效果,采用同種菌株發(fā)酵進(jìn)行了3輪以上的產(chǎn)氫試驗(yàn)。在每一循環(huán)的制氫對(duì)數(shù)階段結(jié)束時(shí),通過(guò)在介質(zhì)中添加醋酸鈉,可在三個(gè)循環(huán)內(nèi)實(shí)現(xiàn)有效的重復(fù)間歇制氫。在第2、3輪分批發(fā)酵中的效率分別為94.9%和90.6%。與第一輪相比,第四輪的效率下降了59.2%,第四輪的低效率可能是由于細(xì)菌的活力的降低。因此,通過(guò)連續(xù)添加醋酸鈉可實(shí)現(xiàn)三個(gè)循環(huán)的高效重復(fù)批量制氫。

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圖注:光照條件下,無(wú)氮TAPY培養(yǎng)基上R.sphaeroides DSM 5864在重復(fù)間歇累積產(chǎn)氫量。第1次(●);第2次(◆);第3次(▲)和第4次(■)循環(huán)的分批發(fā)酵。在每一輪試驗(yàn)后,按照材料和方法中的描述留下復(fù)制瓶,不添加醋酸鈉作為對(duì)照。

生物制氫在可持續(xù)的氫經(jīng)濟(jì)中發(fā)揮重要作用,在未來(lái)的生物工業(yè)中,可以利用廉價(jià)的有機(jī)廢物,通過(guò)暗發(fā)酵和光發(fā)酵產(chǎn)生氫氣。PNSB光發(fā)酵制氫在利用光照和各種有機(jī)廢棄物方面具有相當(dāng)大的優(yōu)勢(shì)。


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